产品目录

本试剂盒是为快速分离大肠杆菌基因组DNA而研发的，试剂盒包含膜嵌入式柱子，能结合10μg以上的基因组DNA。对于革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌，Digestion solution和蛋白酶K处理革兰氏阴性菌，溶菌酶和蛋白酶处理和消化革兰氏阳性菌。PW solution和Wash buffer洗掉不能结合到柱子上的核苷酸，蛋白，盐和其他杂质。纯化的基因组DNA用于大部分分子生物学试验，包括限制性内切酶消化，PCR，Southern-blotting等。

• 如果Digestion Solution出现沉淀，请55℃水浴溶解后使用。
  
• 使用前加24mL 100%乙醇到8mL Wash Solution或加48mL 100%乙醇到16mL Wash Solution，如果在运输中外漏导致Wash Solution体积不足，需要测量体积后再加确定加乙醇的量(V:V为3:1).
  
• Elution Buffer是2.0mM Tris-HCl pH8.5.尽管使用Tris buffer pH8.0或水产量会低于20%.
  
• 使用前加1mL或2mL of无菌水到含有10mg或20mg的蛋白激酶K的管子中溶解蛋白激酶K，-20℃保存.
  
• 使用前加12mL异丙醇到18mL PW solution当中，或加24mL异丙醇到36mL PW solution。

• 革兰氏阴性菌(大肠杆菌等)
  
  • 过夜培养的细菌(约2×10⁹个细胞)加到离心管中，10000转离心30秒，弃上清保留菌体。
    注:通常1mL过夜培养的细菌大概为1～2×10⁹个细胞。
    
  • 加180μL Digestion Solution，然后加20μL蛋白酶K (10mg/mL)，震荡，涡旋，56℃孵育30～60min，直到所有的细胞裂解，进行第3步。
    注:如需得到无RNA的DNA，可在水浴后加入20μL RNase A (25mg/mL)室温放置5min。
• 革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌，白喉棒杆菌等)
  
  • 过夜培养的细菌(大概2×10⁹个细胞)加到离心管中，10000转离心30秒，弃上清保留沉淀。
    
  • 加180μL Lysozyme Solution(20mg/mL裂解液，20mM Tris-HCl pH8.0，2.5mM EDTA，1% Triton X-100)，37℃孵育30～60min.
    
  • 加20μL蛋白激酶K，涡旋混匀，56℃孵育直到所有细胞完全裂解，然后直接进行第3步。
    注:如需得到无RNA的DNA，可在水浴后加入20μL RNase A (25mg/mL)室温放置5min。
• 加200μL BD buffer，震荡完全，70℃孵育10min。
  注:沉淀可能会形成，但是70℃孵育10min会消失.如果溶液浑浊，意味着菌体没有完全裂解，基因组的得率降低和污染。
  
• 加200μL无水乙醇，震荡混匀。
  注:加入无水乙醇后可能会出现纤维状沉淀，但不会影响基因组的提取。
  
• 将吸附柱放进收集管中，将溶液和整个纤维状沉淀加到吸附柱中，室温静置2min，12000rpm离心3min，弃掉管子中的溶液。
  
• 将吸附柱重新放进收集管当中，加500μL PW solution，10000rpm离心1min，倒掉滤液。
  
• 将吸附柱重新放进收集管，加500μL Wash solution，10000rpm离心1min，倒掉滤液。
  
• 将吸附柱重新放进收集管，10000rpm离心2min，去除残余的乙醇.
  
• 取出吸附柱，放入一个新的1.5mL离心管中，加入50 Elution Buffer至膜中央，静置3min，10000rpm室温离心1min，收集DNA溶液。提取的DNA可立即进行下一步实验或-20℃保存。
  注:将Elution Buffer加到管子的中央非常重要.在65～80℃提前预热能提高洗脱效率。